5. 除去PBS液，每張切片加1滴或50μl 即用型MaxVisionTM 試劑或SP試劑（采用武漢默沙克效果更佳），室溫下孵育10-15分鐘。PBS沖洗3次，每次3分鐘。

6. 除去PBS液，每張切片加2滴或100μl新鮮配制的DAB或AEC溶液，顯微鏡下觀察3-5分鐘（DAB）或37℃環境下10-30分鐘(AEC)。

7. 自來水沖洗，蘇1木素復染10分鐘，PBS或自來水沖洗返藍。如果用DAB顯色，則切片經過梯度酒精脫水干燥，二甲本透明，步驟同H-E染色，中性樹膠封固；如果用AEC顯色，則切片不能經酒精脫水，大鼠elisa試劑盒價格，而直接用水性封片1劑封片。

由于HRP的底物H2O2本身又是酶的抑1制劑，因此酶促反應中使用的H2O2不能過量。應控制在經較短時間反應后呈色即達高峰（說明H2O2已消耗殆盡）。這樣即使再延長時間也不會增加反應產物的顏色。+ c0 `# W2 }$ k* k& p

酶與抗1體交聯的方法有許多種，根據酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊1二醛二步法和過1法。常用過1鹽氧化法，大鼠elisa試劑盒，這種方法法只適用于含糖量較高的酶。過1將HRP分子表面的多糖氧化為醛基，醛基與抗1體分子上的氨基形成Schiff堿而結合。后者可進一步用NaBH4(或1胺)還原生成穩定的酶標記抗1體。

　其步驟為：先將抗原(或抗1體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg／ml左右，于聚本板孔內加0.1ml，大鼠elisa試劑盒廠家，4℃過夜，次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標記抗1體用1％BSA-PBS液依次稀釋成1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600……(根據據抗1體的滴度而定)，分別加入反應孔中，每個稀釋度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小時后洗滌。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分鐘。以2M H２SO４ 0.05ml終止反應。$ J/ A& ]3 Y: S

　　結果判定主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值。并以OD為縱座標，結合物濃度為橫座標，繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右，且曲線斜率最1大時的酶標抗1體稀釋度，大鼠elisa試劑盒生產，即為該標記物的工作濃度。

　　有關試驗的試劑及器材均見ELISA部分。

要說明的是，本法為ELISA直接法，所測的工作濃度與在實際應用中的最適濃度可相差幾個滴度。這就要求在建立ELISA實驗系統中，因此基礎上還應進一步確定實際工作濃度(可采用方陣法)，以達到最適的實驗條件。

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