一、產品概述 金剛烷胺酶聯(lián)免疫反應測試盒利用競爭性酶聯(lián)免疫反應原理,對組織(牛肉、雞肉和豬肉)和其他樣品中金剛烷胺的殘留進行定量檢測。金剛烷胺曾被美國食品藥品監(jiān)督管理局批準用作抗病毒藥物和抗震顫麻痹藥使用。它是1-金剛胺或1-氨基金剛烷的有機化合物,意味著它的結構組成是一個金剛烷主鏈和四個次甲基位置中有一個取代氨基。根據(jù)美國疾病預防控制中心,金剛烷胺在美國不再被推薦用作治療流感,此外,它作為抗帕金森病藥物的有效性是不確定的,2003的Cochrane系統(tǒng)評價得出結論對它的療效和安全性的支持與反對證據(jù)不足。2005年,報道稱,中國家禽農戶已經使用金剛烷胺來保護禽類抗禽流感,那時起,中國政府監(jiān)管機構已經禁止它作為獸藥使用。 金剛烷胺酶聯(lián)免疫反應測試盒為養(yǎng)殖者和政府監(jiān)督管理部門提供了更準確快速檢測金剛烷胺殘留的方法,該試劑盒有以下特點: ? 高回收率(80%以上),快速(1小時之內完成提取過程)低成本提取。 ? 高靈敏度(0.5ppb);低檢測下限(肉類0.25ppb)。 ? 檢測過程只需要不到2小時。 ? 高重復性。 二、試劑盒原理 金剛烷胺酶聯(lián)免疫反應測試盒基于競爭比色酶聯(lián)反應原理,含有金剛烷胺的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時,樣品同金剛烷胺-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有金剛烷胺,會競爭結合板上包被的抗體,抑制金剛烷胺-HRP與包被抗體結合。加入底物后,產物的顏色強弱與樣品中金剛烷胺的濃度成反比。 三、試劑盒組成 已包被抗體的酶標板、標準液6種、回收用100ppb(Spiking)、金剛烷胺酶標抗原、10×樣品提取液 金剛烷胺純化試劑、20×濃縮洗液、終止液、TMB底物(TMB Substrate) 四、試劑盒的保存 本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存,有效期為一年。如果超過兩周以上不使用試劑盒,請將金剛烷胺-HRP和金剛烷胺標準品放置-20℃冷凍保存。 酶聯(lián)免疫反應測試步驟 (1) 加入100mL的標準品或樣品于所設定的孔中; (2) 在每孔中加入50mL金剛烷胺-HRP酶標抗原,輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘; (3) 室溫(22.5±2.5)°C避光孵育30分鐘; (4) 洗板3次,每次應該加入250mL1×洗液,最后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干; (5) 加入100mL的TMB底物; (6) 在室溫(22.5±2.5)°C避光孵育15分鐘,加入100mL的終止液終止反應,在450nm下讀OD值 (底物本身是無色的,顏色發(fā)生變化不能使用。孵育時適當覆蓋微孔板)。 結果計算 (1) 分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。 相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ′ 100 (2) 以相對吸光度值為縱坐標,標準濃度為橫坐標建立標準曲線。 (3) 從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。 備注:如結果呈陽性反應,應該用其他檢驗方法(如色譜/質譜方法等)進行確證。