僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

禽流感H5病毒IgG抗體（AIV）檢測試劑盒（ELISA）
說明書


貨號：INS0030003



    使用前，請務必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術支持專線，咨詢清楚再進行實驗。



【產品名稱】
通用名稱：禽流感H5病毒IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H5 Virus（ELISA）

【包裝規格】
48T/盒，96T/盒

【預期用途】
本試劑用于檢測禽血清中流感H5病毒IgG抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等

【檢驗原理】
  本試劑盒系由預包被禽流感H5病毒IgG抗體抗原的酶標板（固相抗原，貨號：INS0030003C）、抗體工作液（貨號：INS0030003J）、酶標記物（酶標抗體，貨號：INS0030003E）及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法原理檢測禽血清或血漿中禽流感H5病毒IgG抗體。實驗時在酶標板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有禽流感H5病毒IgG抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感H5病毒IgG抗體。

【主要組成成分】
主要成分
組分	數量	主要成分
陰性對照	1ml/管	不含待測物的緩沖液
陽性對照	1ml/管	含待測物的緩沖液
包被微孔板	96T	預包被固相抗原
酶標記物	10mL	酶標記的檢測抗體
抗體工作液	6mL	抗體緩沖液
底物液A	6mL	工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
終止液	6mL	酸稀釋液
20×濃縮洗滌液	30mL	含0.15%Tween20的PBS
說明書	1份	--
自封袋	1個	--
不干膠	2片	--
稀釋板	1塊	--
陰陽性對照已經通過測試，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材
  1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】
  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為28天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

【適用儀器】
  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。

【樣本要求】
  樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮做為防腐劑。
1、血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
2、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。
3、蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。
4、用工作洗滌液將待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

樣本保存和穩定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前，所有的組分都要至少復溫2h，確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產生，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內使用。

操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，陰性/陽性對照和樣品，建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設置陰陽性對照孔、樣本孔，陰陽性對照孔各加對照品50μL，樣本孔加樣本50μL。
5、每孔加抗體工作液50μl，混勻，置37℃反應30分鐘。
6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
7、所有孔加入辣根過氧化物酶標記物100μL。
8、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 
實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥0.98，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×55%。

【檢驗結果的解釋】
1.PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100；
2.PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內使用，過期產品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。

【產品性能指標】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。
2、陰性結果
陰性對照的OD值高于0.98。
3、陽性結果
陽性對照的OD值低于陰性對照的OD值的55%。
4、特異性
本試劑盒識別天然和重組禽流感H5病毒IgG抗體，與結構類似物無交叉。
5、穩定性
    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

技術提示
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變為藍色，代表底物溶液已經失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變為黃色。
6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理
  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序，每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。

     黃石市艾恩斯生物科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發與生產的企業。目前可提供各種抗體、免疫學試劑盒、生化試劑、分子生物學試劑等高品質產品，服務涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。而且，在此基礎上建立獨立的第三方科研檢測實驗室，為各類科學研究提供有力的檢測技術支持。
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