離心分離技術(shù)在應(yīng)用上可分為制備型超速離心和分析型超速離心,本文將著重敘述制備型超速離心技術(shù)的應(yīng)用。制備型超速離心是濃縮與純化各種顆粒的最常用方法,依據(jù)被沉降顆粒的S值與ρ值特性不同,具體可分為下述幾種方法: (一)、密度梯度離心法 密度梯度區(qū)帶離心法是在惰性梯度介質(zhì)中將樣品加進行沉降平衡或離心沉降,把顆粒在一定的離心力下分配到梯度中特定的某些位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。此方法進行分離主要依據(jù)介質(zhì)與顆粒間的密度差(ρ-ρ0)不同。適用于那些密度值有明顯差別而沉降系數(shù)卻相差不大的顆粒,也就是那些ρ值相遠而S值相近的顆粒。在本法中惰性梯度介質(zhì)的主要作用是防止對流混合液體介質(zhì)從而能夠保證分離后的各區(qū)帶不受損害。 (二)、差速沉降離心法 組織勻漿液中主要用于分離沉降系數(shù)相差較大細胞器的粗提和濃縮。此法是依據(jù)S值不同,即各種顆粒的形狀?質(zhì)量和大小等不同,沉降速度在同一離心加速度作用下,存在著快慢差異而得到分離的。它適用于沉降系數(shù)差異較大,純化顆粒間S值相遠的那些顆粒。 差速離心顆粒沉降所需的離心力和離心時間首先要選擇好。在一定的離心時間內(nèi)當(dāng)以一定的離心力進行離心時,就會得到在離心管底部最重和最大顆粒的沉淀,在加大轉(zhuǎn)速下分出的上清液再進行離心,又得到第二部分含較小和較輕顆粒及較大較重顆粒的沉淀的上清液,即能把液體中的不同顆粒如此多次離心處理,較好地分離開。此法所得的沉淀仍雜有其他成分,是不單一的,需經(jīng)過2~3次的再離心和再懸浮,才能得到較純的顆粒。 差速離心的優(yōu)點是操作簡易,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子。缺點是須多次離心,沉淀中有夾帶,分離效果差,不能一次得到純顆粒,沉淀于管底的顆粒受擠壓,容易變性失活。 低溫離心